Mammalian Cell Expression System 哺乳動物細胞表達系統

哺乳動物細胞表達系統



在過去的20年裡，生產的重組蛋白（γ-蛋白）已成為日益有用的產品在生物藥品，醫療應用，尤其是純化的r -蛋白適合結構與功能的分析。大多數的r -蛋白適用於這種能力是複雜的分子，需要修改的翻譯後進行全面的生物活性和天然構象。在這方面，哺乳動物細胞培養生產優越的r -蛋白，因為它們擁有適當的機制對蛋白質折疊和翻譯後修飾。 GenScript建議其真核表達服務的案件，其中對蛋白質折疊至關重要的客戶打算申請個案的內部機制的大腸桿菌是無法表達的蛋白質有足夠的時間和質 量。我們的蛋白表達的團隊可以產生毫克，蛋白質水平哺乳動物細胞在不到4個星期。研究人員可以採取後續行動，在有希望的線索迅速處理。

哺乳動物細胞的優勢表達：



     *執行能力的特殊翻譯後修飾和正確折疊

     *穩定和快速的瞬態蛋白表達

     *強大的子細胞病毒（CMV，SV40）的蛋白表達的調節

     *高表達水平

     *大型蛋白生產



服務內容：



一，載體建設和改善



     *對於穩定或瞬時表達，GenScript可以克隆客戶的基因建設成為客戶的真核表達載體。根據要求，GenScript將增加分泌信號或標記在每個表達載體，以便最終恢復的蛋白通過親和層析。對於更複雜的項目，如那些需要特定的翻譯後修飾，形成了多聚 複合物的形成具體二硫橋內部或之間肽或特殊糖基化，GenScript建議其客戶向量。我們還可以標記所需的基因，基因片段，或融合興建一座熒光標記，如 綠色熒光蛋白。此外，我們可以生成和識別的高生產力穩定的細胞系，適合大規模行動，cGMP生產，或兩者兼而有之。



二。穩定的基因表達（SGE)長期生產目的



     *整個工作，從轉染，選擇和隔離群體的克隆細胞，通過無性系評價為初級生產力和適應性增長無血清懸浮培養，提供長期的生產穩定性和可擴展性。根據要求，GenScript將適用於使用甲氨蝶呤基因擴增和隨後的克隆和銀行。 GenScript也完全有能力執行完成的研究和生產的穩定遺傳的存在。 GenScript提供了銀行的細胞群的prebanks，masterbanks，工作細胞庫。



三。瞬時基因表達（TGE）



     *穩定的基因表達是通過重組基因插入（S）進入宿主基因組中。然而，識別和鑑定重組細胞系是一個昂貴和耗時的過程。更快的方法的r -蛋白生產有時首選，特別是對分包工程或優化大規模生產線。快速蛋白產量（自毫克至克）用豬傳染性胃腸炎與哺乳動物的細胞是非常適合這一需要。相對於穩定 的基因表達，豬病毒包括短期的r -蛋白的產量，通常不超過than10天轉染後，在缺席的基因篩選的質粒DNA。我們的瞬時基因表達利用暫停調整細胞容易產生低至幾毫升或高達100升。 的產品，其中包括收穫細胞培養液或收回的蛋白質，可以提供給客戶端4個星期後，一個合適的表達載體已構建。根據要求，GenScript可以克隆客戶端的 基因構造成高效率的載體，專門為豬傳染性胃腸炎制度。



四。工藝的開發和放大



     * GenScript可以優化系統的增長和生產的媒體，還提供了詳細的分析的增長速度，傳代比，細胞團，並具體和體積生產率，提高生產率的條件。此外，規模 式模型可用於預測電池的性能。 GenScript採用了新穎及高生產力的專有系統，功能與預測高吞吐量。

     * 15N -或13C標記的蛋白表達。



五，淨化



     *在表達時間已過，培養液是收穫的上清或細胞的一小部分是收集設施蛋白質純化。通常蛋白質純化親和柱進行，但其他列，包括凝膠過濾，離子交換和疏水性，可作為良好。至於淨化標記被刪除通過蛋白酶，並進一步純化蛋白質凝膠過濾。

     * 15N -或13C標記的蛋白表達。



六。蛋白定性



     *在完成每個項目，我們的專家確認，最終產品符合客戶的具體規格。通常情況下，這種評估包括任何或所有以下：SDS或當地頁其次是適當的染色，蛋白質濃度測定，免疫印跡，吸收光譜，N端測序，質譜，核磁共振光譜和活動化驗。

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